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黄曲霉毒素B1酶联免疫测试盒 96孔板

型    号:黄曲霉毒素B1酶联免疫测试盒 96孔板
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适用范围与检测意义:本品适用于谷物、饲料、食用油、调料和发酵酒等物质中黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1简写为AFB1)的快速检测。黄曲霉毒素B1是目前已知的化学物质中致癌性很强的一种,对人和若干动物具有强烈的毒性,其毒性作用主要是对肝脏的损害。黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。

黄曲霉毒素B1酶联免疫测试盒 96孔板黄曲霉毒素B1酶联免疫测试盒 96孔板的详细资料:



黄曲霉毒素B1酶联免疫测试盒 96孔板

水质检测仪
便携式气体检测仪

黄曲霉毒素B1(AFB1)的检测

方法一  试纸卡法

1. 适用范围与检测意义:本品适用于谷物、饲料、食用油、调料和发酵酒等物质中黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1简写为AFB1)的快速检测。黄曲霉毒素B1是目前已知的化学物质中致癌性很强的一种,对人和若干动物具有强烈的毒性,其毒性作用主要是对肝脏的损害。黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。

2. 测定原理:本品采用高度特异性抗体抗原反应及免疫层析分析技术,通过单克隆抗体竞争结合AFB1-BSA偶联物和样品中可能含有的AFB1的原理。试剂含有被事先固定于膜上测试区(T)的AFB1-BSA偶联物和被胶体金标记的抗AFB1单克隆抗体。检出限为5ng/ml。

3. 所用器皿:常量天平±0.1g;蒸发皿或烧杯;量筒;滴管;移液管;小型粉碎机;离心机等。

4. 样品制备:

4.1 谷物:任取5g以上有代表性样品并充分碎,准确称取2.0g均匀粉碎试样于配套离心管中,再准确加入4ml纯净水和4.0ml的乙酸乙酯,将瓶塞盖紧密封,充分振荡5min,离心得上清液,将上清液用吸管吸出2.0ml到蒸发皿或小玻璃杯中,用电吹风吹干上清液,再根据样品的种类用以下规定的稀释液量用铝箔袋内配套吸管反复冲洗,彻底溶解杯底所有的固体,此溶解液为样品提取液即检测液。考虑不同样品对黄曲霉毒素B1的zui高含量要求,可参考下表用稀释液溶解杯底固体:

谷物残留限量(ppb)
 2.5
 5
 10
 20
 
使用稀释液体积(ml)
 0.4
 0.8
 1.6
 3.2
 

4.2 饲料(以残留限量50ppb计算):任取5g以上有代表性样品并充分粉碎,准确称取2.0g均匀粉碎试样于配套离心管中,再准确加入4ml纯净水和4.0ml的乙酸乙酯,将瓶塞盖紧密封,充分振荡5min,离心得上清液,将上清液用吸管出0.5ml到蒸发皿或小玻璃杯中,用电吹风吹干上清液,再用2ml的稀释液量用铝箔袋内配套吸管反复冲洗,彻底溶解杯底所有的固体,此溶解液为样品提取液即检测液。如果残留限量是30ppb,则用1.2ml的稀释液溶解;如果残留限量是40ppb,则用1.6ml的稀释液溶解。

4.3 食用油:称取2.0g油样于小烧杯中,用8ml正己烷分次将试样转移至分液漏斗中,准确加入4ml纯净水充分振荡3min,吸去上层正己烷层,再加入4ml的乙酸乙酯,将瓶塞盖紧密封,充分振荡5min,静置或离心得上清液,将上清液吸出2ml到小玻璃杯中,用电吹风吹干,再用稀释液溶解后为样品提取液。

4.4 酱油、醋、发酵酒:称取25.0g样品于小烧杯中,用5ml蒸馏水将试样转移到分液漏斗中,加入20ml三氯甲烷,加塞轻轻振摇3min,静置分层。放出下层三氯甲烷层,经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于蒸发皿中,再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中,重复振摇提取,三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中,zui后用少量三氯甲烷洗涤过滤器,洗液并于蒸发皿中,用电吹风吹干。吹干冷却后,准确加入稀释液,将蒸发皿中的凝结物充分溶解。

5  测定

5.1 使用前将试纸卡和待检样本溶液恢复至室温。

5.2 从原包装袋中取出试纸卡,打开后平放在桌面上,在1小时内尽快地使用。

5.3 用滴管吸取待检样品溶液,滴加3滴于加样孔中,加样后开始计时。

5.4 结果应在10min时读取,超过12min的时间判读无效。

6 结果判定

6.1 阳性:C线显示出红色线条,T线不显色,或C线显示出红色线条,而T线颜色非常模糊时,判为阳性。表明:AFB1含量超过样品允许量。

6.2 阴性:C线显示出红色线条,T线同时显示出红色线条,且T线颜色接近C线或者深于C线时,判为阴性。表明:AFB1含量低于样品允许量。

6.3 无效:C线不显示出红色线条,而T线显示出红色线条,该试纸卡判为无效。建议使用新的试纸卡重新测试。

7 说明

7.1 勿触摸试纸显示区。

7.2 发现过期,破损,污染时不可再用。

7.3 本品应保存在干燥阴凉处(4-30℃),有效期18个月,生产日期见包装。

7.4 本品为一次性产品,勿重复使用。

7.5 如遇稀释液不足,可用蒸馏水加入稀释液中混匀后使用。

7.6 本品为筛选方法,任何阳性结果请用其它方法作进一步确认。

7.7 有条件的实验室可以用AFB1标准品作为判断参考。

 

方法二 酶联免疫定量检测试剂盒法

本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定谷物中AFB1。该测试盒反应孔可拆卸,可测单份样品,也可测多份样品。定量分析时需有含450nm波长的微孔板酶标仪。

 

1 概要

黄曲霉毒素是由曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉等产生的次级代谢产物,主要污染玉米、花生、坚果等。天然污染的黄曲霉毒素以AFB1为主,AFB1属于强烈致癌物质,肝脏是其主要的靶器官,具有极强的急性毒性和致癌性。

AFB1检测方法主要有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和ELISA方法,本试剂盒是以应用单克隆抗体为基础的ELISA检测方法,可以准确快速检测粮谷类和花生及饲料中的AFB1。

 

2 测定原理

本试剂盒采用固相酶联免疫吸附原理,利用间接竞争ELISA法进行测定。用抗原包被微孔板,加入AFB1标准品或样品、抗AFB1单克隆抗体进行孵育后,将未与包被抗原结合的抗体洗去;再加入酶标记的抗鼠IgG抗体孵育,加入显色液,经过终止液终止后,用酶标仪在450nm处测定OD值。

 

3 提供的物品

----微孔板…………………………………………………………… 包被有AFB1-BSA

----5个浓度的AFB1标准溶液(各0.5mL)

标准1:0ng/mL…………………………………………………………….直接使用

标准2:0.1ng/m…………………………………………………………….直接使用

标准3:0.2ng/mL ………………………………………………………….直接使用

标准4:0.5ng/m………………………………………………….…………直接使用

标准5:1.0ng/m………………………………………….…………………直接使用

----抗AF B1单克隆抗体溶液(6mL)……………………………………………直接使用

----酶标物(12mL)..………………………………………………………………直接使用

----显色液(12mL)..………………………………………………………………直接使用

----终止液(6mL)…………………………………………………………………直接使用

----浓缩洗液(30mL)..……………………………………………………………稀释使用

 

4 盒中未提供,需自备物品

----微孔板酶标仪(可于450nm处测定)、振荡器、粉碎机、微量移液器

----量筒、漏斗、容量瓶、快速定性滤纸

----氯化钠(分析纯)、甲醇(分析纯)、去离子水或蒸馏水

 

5 操作者注意事项

        ----标准溶液中含有黄曲霉毒素,应特别小心。

----使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液用pH7的次氯酸溶液(10%v/v)浸泡过夜。

----终止液含有*,避免接触皮肤。

----每次加样后立即将所有试剂放回2~8 ℃。

----每步加样时间应控制在5min内。

----孵育过程中应避光。

----不要使用过期试剂盒。

        ----不要交叉使用不同批号的试剂盒中的试剂。

 

6 储存条件

        ----保存试剂盒于2~8℃。不要冷冻.

        ----显色液对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。

        ----将不用的微孔板放进原铝箔袋中,置2~8℃保存。

 

7 试剂变质的标志

        ----标准1的吸光度值小于0.5个单位(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。

 

8 样品处理

----样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存。

----取5g粉碎的有代表性的样品,加1.25g氯化钠及25mL70%甲醇-水溶液。

----强力振荡3分钟。

----用快速定性滤纸过滤。

----取1mL滤液,加水4mL进行稀释。

----取50μL稀释液进行分析。

----*根据需要可以增减样品量,但甲醇-水溶液的量也应相应增减。

 

9 酶免疫分析程序

----浓缩洗液为10倍浓缩液,使用时与去离子水或蒸馏水按体积比1:9稀释后使用。

----取所需数量的板条插入微孔架,用洗液洗涤微孔板3min×2次。

----加入50mL标准品或处理好的样品到微孔,记录样品及标准的位置,每个标准和样品必须使用新的吸头。

----加入50mL抗体溶液到每个微孔(注意移液器管尖不要接触到孔中的液体,避免交叉污染)中,37℃孵育90min。

----甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板3min×3次,zui后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。

    ----每孔加入酶标物100mL,37℃孵育60min。

    ----用洗液洗涤微孔板3min×5次,zui后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。

    ----每孔加入显色液100mL(2滴),37℃孵育10~12min。

    ----每孔加入终止液50mL(1滴),立即用酶标仪在波长450nm处测定吸光度值(OD值)。

注:在定量分析中,显色液和终止液需要用移液器准确量取。

 

 

10 样品浓度计算

以标准溶液OD值与标准1OD值的比值为纵坐标,所对应标准溶液浓度(ng/mL)的对数值为横坐标,制作标准曲线。根据样品OD值与标准1OD的比值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为AFB1浓度的对数值,求得反对数即为测定液中AFB1浓度C(ng/mL),按下列公式计算出样品中AFB1含量:

AFB1含量(mg/kg)= C×K

式中:C:稀释后样品提取液中AFB1含量(ng/mL)

            K:样品稀释倍数(按照本说明书中样品处理程序方法为25)

 

11试剂盒主要技术指标及参数

测试盒zui低检出浓度0.1ng/mL,回收率70%~120%,与AFB2的交叉反应系数小于1%,与AFG1的交叉反应系数为4.65%,与AFG2交叉反应系数小于1%。试剂盒校正曲线的线性范围0.1~1.0ng/mL,试剂盒条内变异<10%,条间变异<15%。

 


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